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通用型全基因組擴增試劑盒模板變性觀察

更新日期: 2022-12-10
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通用型全基因組擴增試劑盒(WGA)是用于基因組DNA擴增全基因組的試劑盒,可以方便、簡單、快速、經濟的得到穩定產量的基因組DNA擴增樣品。產物可用于多種后續試驗,包括多重PCR、長片斷PCR、定量PCR、克隆、 文庫構建、單倍型分析、測序、基因芯片分析、各種遺傳分析(片段差異, 微衛星差異,SNP,STR)等。操作簡便快捷,恒溫(30℃)反應,無須PCR儀即可實現擴增。本產品只能用于科研。
模板變性:
1. 在PCR塑料管中加入9μL WGA溶液A,加入1μL純化好的基因組DNA模板 (DNA含量在10ng-100ng之間)。
2. 在PCR儀器上95℃3分鐘變性模板DNA。注意:必須打開熱蓋。
3. 冰上放置待用。
4. 加入10μL 2×WGA溶液B,輕柔吹打混勻。
5. 加入1μL phi 29 DNA聚合酶(10U/μL),輕柔吹打混合均勻。
6. 30℃保溫10-12小時。使用PCR儀進行30℃保溫并打開熱蓋保溫。如果采用30℃水浴,在樣品管中加入30-50μL石蠟油以防水分蒸發,因為30℃長時間的水浴也能使水分蒸發到管壁,從而改變反應體系中各成分的濃度、降低WGA反應效率。如果模板DNA量比較高,WGA三小時即可檢測到DNA擴增。
7. 65℃保溫20分鐘使phi29 DNA聚合酶滅活,然后-20℃長期放置或立即使用。注:由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性,所以強烈推薦反應結束后65℃保溫20分鐘以將酶滅活以免其干擾后續反應或長期保存時其降解DNA。
 
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